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DNA鑒定之測序(SNP分型方法和技術的檢測方法)

在既有的各類方法中,測序( sequencing)對突變的檢測相對準確,但耗時、費力,旦花費高。目前出現了一種新興的、針對人群中大規模突變檢測的測序方法——多重PCR測序法(multiplex PCR sequencing)。多重PCR測序的原理是將待測基因切割成數百個堿基大;同時在一組反應管中進行20~40個PCR反應及脫氧測序反應;然后將含有20~40組序列的終止反應池上樣到測序膠的單組泳道上;電泳分離后轉到尼龍膜上,用片段專一性的寡核苷酸探針和膜雜交,讀出相應的PCR片段序列。原始反應池中有多少PCR反應就雜交并洗脫多少次,以用于閱讀分析有的序列。此方法的優勢是從一塊膠上可以取得更多的測序信息,信息量提高20~40倍,并避免了以往發現突變后再進行測序的 “兩步走”過程。20重PCR同時測序的方法已很可靠、成熟并被用于常規研究中,β-肌漿球蛋白全序列測定及所含突變的鑒定是對該技術的最初檢驗。多重PCR測序針對眾多個體的橫向檢測,將隨著自動測序的介入,使其速度和精確度得到進一步的提高。

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